Преподобный Иов родился в 1550 году в Галиции и назывался в миру Иоанн Железо. Десятилетним отроком он поступил в Угорницкий монастырь и 12-ти лет был уже пострижен в мантию с именем Иова, по совершеннолетию возведен в священнический сан, а тридцати лет удостоен великой схимы, причем ему было возвращено имя Иоанн. Он особенно любил это имя и всегда им подписывался, но к лику святых был причислен с именем Иова.

Преподобный Иов был настоятелем Дубенского монастыря, где много писал в защиту православия. Однако, жажда подвижнического уединенного жития заставила его перейти на святую гору Почаевскую, но и там его избрали настоятелем. Для молитвенных подвигов он вынужден был удалиться в каменную пещеру.

Иов был служителем непрестанной молитвы. Какой силы достиг святой старец над грешной душой человеческой, показывает следующий случай: однажды, придя ночью на гумно монастырское, он увидел вора, который хотел взвалить себе на спину куль зерна. Преподобный помог ему поднять этот куль, но напомнил ему об ответе на страшном Суде Христовом. Потрясенный кротким словом святого, грешник упал ему в ноги с мольбой о прощении.

В обители, которую Преподобный Иов окружил оградой, он ввел общежительный устав и воздвиг Свято-Троицкий собор, а потом и еще шесть меньших церквей. Он создал Почаевскую типографию и продолжал писать в защиту православия. А в свободное время Преподобный Иов любил заниматься садоводством и развел в Почаеве прекрасный сад.

В 1620 году он принимал участие в Киевском Соборе, осудившим унию и постановившем твердо стоять за православие. Под постановлением этим есть подпись: «Иоанн Железо, игумен Почаевский».

Скончался Преподобный Иов 28 октября 1651 года. Мощи его были открыты в 1659 году после трехкратного его явления митрополиту Киевскому Дионисию. Вскоре после этого в обитель приехала на богомолье Ева Домашевская. Ночью она увидела, что в Троицкой церкви сияет свет и услышала пение. Служанка ее, девица Анна, пошла узнать, какое служение совершается, и к своему ужасу увидела, что церковные двери открыты, а посреди церкви, между двумя ангелами, молится в необычайно светлом одеянии Преподобный Иов. Обратившись к девице, он приказал ей позвать игумена Досифея, в это время безнадежно больного, и дал ей для него плат, омоченный в миро. Больной, получив этот плат, помазался им и получил исцеление.

В 1675 году татары осадили Почаевский монастырь. На третий день осады, во время чтения акафиста, над монастырем явилась Сама Царица Небесная. Татары пробовали пускать стрелы в небесное явление, но стрелы возвращались назад и поражали их самих. Тогда татары бежали.

В 1721 году Почаевским монастырем завладели униаты. Чудотворную икону Божией Матери они чтили, но доступ к мощам преподобного для верующих закрыли. Однако, через 20 лет чудеса Преподобного заставили их допустить к ним верующих.

В 1831 году униаты были воссоединены с Православной Церковью. Мощи Преподобного были вновь торжественно открыты, а Почаевский монастырь объявлен Лаврой.